Isolasi DNA dengan Metode QIAamp dari Jaringan

Prosedur Isolasi DNA dengan QIAamp DNA Isolation Kit (QIAGEN)

0
97
isolasi DNA dengan metode QIAamp

Isolasi DNA dengan metode QIAamp digunakan untuk purifikasi cepat dan berkualitas tinggi DNA mitokondria, bakteri, parasit, virus dan jaringan. QIAamp menggunakan membran silika purifikasi asam nukleat dari jaringan, swab, cairan serebro spinal, darah, cairan tubuh dan sel dari urin.

Tidak diperlukan homogenisasi mekanikal, karena jaringan lisis secara ezimatik. Purifikasi DNA dengan QIAamp DNA mini kit ini dapat digunakan dalam jangkauan luas, amplifikasi, meliputi PCR dan qPCR realtime, southern blotting, SNP, dan genotyping STR dan penelitian farmakologis.

QIAamp DNA minikit dapat digunakan isolasi DNA dari jaringan sampel manusia dengan prosedur cepat spin-column atau vacum. Tidak membutuhkan ekstraksi kloroform. DNA terikat ke membran gel-silica QIAamp ketika terjadi kontaminasi. PCR inhibitor seperti protein, secara tuntas membuang 2 wash step. Berikut prosedurnya, yang penulis Pahami.

Persiapan Isolasi DNA dengan Metode QIAamp dari Jaringan

A. Alat

  1. Blue Tip
  2. Yellow Tip
  3. Sentrifus
  4. Waterbath
  5. Save Lock 1,5 ml

B. Reagen

  1. Qiagen Kit
  2. Ethanol Absolut

Prosedur Isolasi DNA dengan Metode QIAamp dari Jaringan

  1. Timbang jaringan kurang lebih 25 mg
  2. Masukkan ke dalam safe lock tube 1,5 ml
  3. Tambahkan 180 ul buffer ATL lalu di vortex
  4. Tambahkan proteinase K sebanya 20 ul, lalu vortex
  5. Kemudian inkubasi dengan suhu 56 derajat celcius selama 3 jam/ overnight (sampai jaringan hancur) sambil divortex setiap 1 jam.
  6. Lalu vortex 20 detik.
  7. Tambahkan 200 ul buffer AL, dan vortex selama 15 detik
  8. Inkubasi dalam suhu 70 derajat celcius selama 10 menit, lalu vortex 15 detik
  9. Tambahkan 200 ul ethanol absolut lalu divortex
  10. Pindahkan larutan ke QIAmp Spin column
  11. Kemudian sentrifugasi dengan kecepatan 8000 rpm selama 1 menit.
  12. Buang filtrat, pindahkan QIAmp spin column pada collection tube 2 ml yang baru.
  13. Tambahkan 500 ul buffer AW1, sentrifugasi dengan 8000 rpm selama 1 menit
  14. Buang filtrat, pindahkan QIAamp spin column pada collection tube 2 ml yang baru.
  15. Tambahkan 500 ul buffer Aw1, sentrifugasi 13.000 rpm selama 3 menit
  16. Sentrifugasi lagi 13000 rpm selama 1 menit
  17. Buang filtrat, pindahkan QIAamp spin column pada safe lock tube 1,5 ml yang baru
  18. Tambahkan buffer AE 50 ul, inkubasi RT 10 menit
  19. Sentrifugasi 8000 rpm 1 menit, eluen 1
  20. Pindahkan column ke safe lock tube yang baru
  21. Tambahkan buffer AE 50 ul inkubasi RT 5 menit
  22. Sentrifugasi 8000 rpm 1 menit, eluen 2
  23. Ukur konsentrasi DNA dengan spektrofotometer dengan panjang gelombang 260 nm
  24. Simpan pada suhu -20 derajat celcius.
Baca Juga:  Perbedaan NGS dan Sanger sequencing

Demikian sharing terkait Isolasi DNA dengan Metode QIAamp dari sampel Jaringan. Apabila ada referensi terbaru atau tulisan diatas ada yang kurang tepat, kami meminta masukan dan asupan agar segera diperbaiki.

Oleh : dr. M. Wiwid Santiko
Yogyakarta, 25 Juli 2017

Ringkasan Artikel
Isolasi DNA dengan Metode QIAamp dari Jaringan
Judul Artikel
Isolasi DNA dengan Metode QIAamp dari Jaringan
Deskripsi
Isolasi DNA dengan metode QIAamp digunakan untuk purifikasi cepat dan berkualitas tinggi DNA mitokondria, bakteri, parasit, virus dan jaringan.
Author
Publisher Name
DokterMuslim
Publisher Logo

LEAVE A REPLY

Please enter your comment!
Please enter your name here